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外泌体递送平台

外泌体(Exosomes)是一类直径在30-150nm的细胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs),具有磷脂双分子层结构,携带多种蛋白质、核酸、脂质等重要的生物信息分子。几乎所有种类的细胞都能分泌外泌体到细胞外环境中,外泌体可作为细胞间传递信息的天然信使,发挥多种调控功能。外泌体的生物合成是一个由多种细胞分子介导的精细调控过程,各种生物活性分子被特异性地分选到外泌体中。因此可以对外泌体进行定向改造,从而赋予其特异性的药物递送载体功能。

子时纳米可提供外泌体定制服务,根据您所提供的需求以满足您理想的效果。

外泌体(Exosomes)是一类直径在30-150nm的细胞外囊泡(EVs),具有磷脂双分子层结构,携带多种蛋白质、核酸、脂质等重要的生物信息分子。几乎所有种类的细胞都能分泌外泌体到细胞外环境中,外泌体可作为细胞间传递信息的天然信使,发挥多种调控功能。外泌体的生物合成是一个由多种细胞分子介导的精细调控过程,各种生物活性分子被特异性地分选到外泌体中。因此可以对外泌体进行定向改造,从而赋予其特异性的药物递送载体功能。

几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体,同时外泌体也存在于体液中,包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸(micORNA、IncRNA、circRNAMRNA、tRNA等)、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面 marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP70 等。因此,外泌体几乎可以与任何疾病相关联,成为疾病标志物、疾病机理、药物开发等研究的创新热点。

子时纳米致力于为广大研究人员提供高品质的外泌体研究解决方案。

1. 外泌体纯化

外泌体的分离纯化目前主要是根据其大小和密度进行操作,常用的方法有差速离心(Differential Centrifugation)、密度梯度离心(Density Gradient Ultra-Centrifugation )、高分子(如PEG)共沉降,尺寸排阻柱分离(SEC)、超滤(Ultra-Filtration)、亲和层析、免疫捕获、微流控等方法。我们通过对各种纯化技术进行实验对比和整合,开发出适用于不同样品的分离纯化策略,可获得满足不同后续应用需求的样品纯度等级。客户可针对不同样品体积和应用需求选择适合的提取方法。

2. 外泌体鉴定

外泌体在纯化过程中容易残留非囊泡结构的污染物,例如:组蛋白,DNA,脂蛋白颗粒等。因此,对纯化的外泌体进行多方面的表征鉴定对于其用于下游实验和向临床转化至关重要。国际细胞外囊泡学会(ISEV)建议对于分离获得的外泌体需要从大小,形态,表面标志物这三个方面进行。除此之外,还可以通过高通量测序,蛋白质谱,代谢组分析等组学方法对外泌体的内含物进行全面分析。

3. 外泌体示踪

为了观察外泌体与细胞的融合情况,可以对外泌体进行各种亲脂性染料标记并与靶细胞共培养,通过共聚集观察细胞对外泌体的摄取行为。我们根据需要,提供外泌体PKH-67(green)、PKH-26(red)、DIO(green)及DlL(red)等亲脂性染料的染色服务,使用ActinRed对细胞骨架进行染色,DAPI对细胞核染色。

PKH26标记的外泌体与MDA‐MB‐231细胞共培养

4. 外泌体载药

外泌体载药策略可以分为内源装载和外源装载,即货物分子在分泌外泌体的细胞中进行装载(内源Endogenous)和提取纯化外泌体后进行装载(外源Exogenous)。 内源性装载的策略一般涉及蛋白/多肽的融合表达,基因药物的过表达等。 相较于内源性货物分子装载,外源性装载具有实验操作相对简单,实验周期短,批次间更为稳定可控等优点。外源性载药的常见策略有共孵育、电转、超声、反复冻融、挤压等方法。外源性装载的药物非常广泛,可以负载的药物有小分子药物比如紫杉醇、阿霉素等:核酸比如miRNA、siRNA;质粒;多肽;大分子比如壳寡糖;Lamp2b(溶酶体相关膜蛋白2),Mapk1(促分裂原活化蛋白激酶1)等。

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